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Prueba de Coombs

Al inyectar suero de una especie en otra (generalmente conejos o cabras), esta última produce anticuerpos antisuero. Este antisuero antiglobulina (suero de Coombs) causa una reacción de aglutinación cuando se enfrenta con eritrocitos de la primera especie. la prueba de Coombs permite demostrar la presencia de tales anticuerpos. El principio de esta prueba fue descrito por Moreschi en 1908, pero Coombs, Mourant y Race la introdujeron, en 1946, en el estudio de los grupos sanguíneos y anticuerpos, cuando el suero fue usado para la inoculación de animales con el fin de inmunizarlos con proteína humana, utilizando el anticuerpo obtenido en la detección de los llamados anticuerpos incompletos.

23 de Junio de 2011: Por Jorge Hugo Martínez

Fundamento

Al inyectar suero de una especie en otra (generalmente conejos o cabras), esta última produce anticuerpos antisuero. Este antisuero antiglobulina (suero de Coombs) causa una reacción de aglutinación cuando se enfrenta con eritrocitos de la primera especie. La prueba de Coombs permite demostrar la presencia de tales anticuerpos.

El principio de esta prueba fue descrito por Moreschi en 1908, pero Coombs, Mourant y Race la introdujeron, en 1946, en el estudio de los grupos sanguíneos y anticuerpos, cuando el suero fue usado para la inoculación de animales con el fin de inmunizarlos con proteína humana, utilizando el anticuerpo obtenido en la detección de los llamados anticuerpos incompletos.

Utilidad

La prueba de Coombs o reacción de antiglobulina se utiliza principalmente para detectar la presencia de inmunoglobulinas fijadas en la superficie de los eritrocitos (autoanticuerpos contra antígenos intrínsecos de los hematíes; aloanticuerpos en un receptor reciente de una transfusión; aloanticuerpos maternos que atraviesan la placenta y se fijan a los hematíes de la cría). También puede indicar adsorción sobre la superficie eritrocitaria de complejos inmunes formados por ciertos medicamentos (penicilina, quinidina, fenacetina, cefalotina, metildopa, procainamida) y su correspondiente anticuerpo, fijación inespecífica de inmunoglobulinas a los hematíes en pacientes con hipergammaglobulinemia (por ej., casos de cirrosis) y reacciones transfusionales. Asimismo, se emplea en trastornos linfoproliferativos, lupus eritematoso sistémico y otras enfermedades parasitarias, infecciosas, neoplásicas e inflamatorias.

Coombs directa

Se utiliza para detectar anticuerpos o depósitos de complemento que se han fijado in vivo a la superficie de los glóbulos rojos y causan su hemólisis prematura y anemia. Permite demostrar la presencia de anticuerpos maternos fijados en la superficie de los glóbulos rojos del recién nacido. Esta prueba no distingue entre anemias hemolíticas por causa autoinmune o inmunomediada. Por lo tanto, la prueba de Coombs está indicada cuando existe sospecha de hemólisis por mecanismos inmunes, como en la anemia hemolítica autoinmune, la anemia hemolítica inducida por fármacos, la enfermedad hemolítica del recién nacido y las reacciones hemolíticas postransfusiones.

Procedimiento

Como reactivo de Coombs se utiliza antisuero antiglobulina con especificidad de especie producido en conejos.

Se extrae sangre del paciente con anticoagulante (EDTA), se centrifuga 5 minutos y se descarta el plasma. Se agregan 2 gotas de estos eritrocitos concentrados a 5 ml de solución fisiológica tamponada para eliminar las proteínas séricas (que podrían neutralizar la antiglobulina) y los residuos de eritrocitos y leucocitos. Se mezcla y centrifuga. Este procedimiento de lavado se realiza 4 veces. En un tubo, se colocan 2 gotas de una suspensión de eritrocitos al 2 o 5% en solución fisiológica. Se añaden 2 gotas de suero de Coombs y se centrifuga 1 minuto a 1000 rpm. Con suavidad, se desprende el botón eritrocitario que se ha formado y se lee sobre la lámpara del aglutinoscopio, en espejo cóncavo o al microscopio. Si hay aglutinación, el resultado es positivo; si no la hay, es negativo.

Se puede determinar el título de la reacción realizando diferentes diluciones. Si se usa una muestra coagulada, el coágulo se rompe con dos varillas de madera, a las que quedan adheridos los eritrocitos. las varillas se colocan en 5 ml de solución fisiológica, y se procede como se describió.

Coombs directa en tarjeta

La variante con tarjeta es un moderno método que se utiliza en los bancos de sangre para los estudios pretransfusionales humanos. Estas tarjetas tienen varias columnas que poseen una zona superior donde se depositan los eritrocitos y el suero de Coombs y en la que se realiza la aglutinación. la zona inferior de dichas columnas contiene un gel de dextrano que, cuando se centrifuga, permite el paso de los glóbulos rojos libres, pero no el de los aglutinados.

Interpretación de los resultados

Si se observa aglutinación, indica la presencia de anticuerpos y/o complemento unidos a los hematíes in vivo.

Limitaciones del procedimiento

Pueden obtenerse resultados falsos positivos por lavado insuficiente de eritrocitos y por presencia de alta cantidad de reticulocitos en la muestra.

Pueden presentarse resultados falsos negativos, si no hay cantidad suficiente de anticuerpos o complemento sobre los eritrocitos, o si el animal fue tratado con glucocorticoides durante 1 semana o más.

El denominado Coombs-control se utiliza para detectar los resultados falsos negativos. Consiste en hematíes sensibilizados con IgG, que se añaden a los tubos con resultado negativo (sin aglutinación). Dichos hematíes control sólo serán aglutinados si el suero de Coombs está libre (lo que confirma la negatividad del test). Si los tubos negativos no aglutinan con el suero Coombs-control, el test no es fiable y hay que repetirlo.

Un test de Coombs positivo no indica necesariamente una hemólisis. Para determinarla se debe realizar recuento de reticulocitos, determinación de bilirrubina, etc.

Coombs indirecta

Permite demostrar in vitro la presencia de anticuerpos libres en el suero. Se usa para realizar tipificación de grupos sanguíneos, pruebas sanguíneas cruzadas y como método para evitar reacciones transfusionales.

Procedimiento

Se toma una muestra de sangre en un tubo con anticoagulante (EDTA o heparina) y en un tubo seco. Se coloca 1 gota de suspensión de eritrocitos y 1 gota de suero problema. Se incuba durante 30-45 minutos a 37 ºC. Se coloca 1 gota de esta suspensión y 1 gota de suero antiglobulina (Coombs). Se centrifuga. Si existen anticuerpos en el suero, éstos se fijan sobre su respectivo determinante antigénico y se produce aglutinación. Se desprende suavemente el botón y se observa sobre la lámpara del aglutinoscopio. Si da negativo, se agrega 1 gota de Coombs positivo, se centrifuga y, si aglutina, se confirma el resultado negativo.

Interpretación de resultados

Si en la prueba de Coombs indirecta se observa aglutinación, significa que existen anticuerpos irregulares en el suero del paciente.

Coombs cruzada

Es una variante de la prueba de Coombs indirecta y se realiza para determinar la compatibilidad entre la sangre del donante y el receptor a transfundir. Si en la prueba de Coombs cruzada se observa aglutinación, indica que estamos en presencia de anticuerpos irregulares en el suero del receptor, por lo que las unidades de sangre que presenten este resultado no deben ser transfundidas al paciente en estudio.